3 血清游离甘油医学检查
3.1 分类
3.2 取材
3.3 原理
(1)
(2)
(3)
3.4 试剂
以Boehringer mannheim游离甘油测定试剂盒为例:
(1)缓冲液Ⅰ:0.2mol/L pH7.5 KH2PO4(用5mol/L KOH调pH)。
(2)81mol/L ATP溶液:125mg ATP溶于2.5ml缓冲液Ⅰ中。
(3)10mmol/L MgCl2溶液。
(5)50g/L Triton X-100溶液。
(7)2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(2-morpholi-noethanesulphonic acid,MES)缓冲液:0.2mol/L,pH7.5(用KOH调pH)。
(8)N-乙基顺丁烯二酰亚胺(N-ethylmaleimide,NEM),20mmol/L(用MES缓冲液配制)。
(9)4-氨基安替比林溶液,15mmol/L(用MES缓冲液配制)。
(10)2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHB)溶液60mmol/L(用MES缓冲液配制)。
(12)1g/L NaN3溶液
(13)酰基辅酶A氧化酶溶液:约120u/ml(用缓冲液Ⅰ配制)。
3.5 操作方法
(1)混合试剂:
①试剂Ⅰ:含缓冲液Ⅰ 4.0ml、ATP 2.0ml、MgCl2 2.0ml、辅酶A 2.0ml、TritonX-100 4.0ml、酰基辅酶A合成酶2.0ml,加双蒸水4.5ml(共20.5ml)。
②试剂Ⅱ:含MES缓冲液10.0ml、4-氨基安替比林6.0ml、TBHB 8.0ml、NaN3溶液2.0ml、TritonX-100 4.0ml、过氧化物酶溶液0.4ml,双蒸水10.0ml(共40.4ml)。
③试剂Ⅲ:NEM缓冲液2.1ml、酰基辅酶A氧化酶2.0ml(共4.1ml)。
(2)各管内加入试剂Ⅰ1ml与试剂Ⅱ2ml,混合,37℃10min。
(3)加入空白与血清标本各50μl,混合后37℃5min,在546nm测定吸光度为A1。
(4)加入试剂Ⅲ 0.20ml,混合,待20~25min反应停止后在546nm测定吸光度为A2。
3.6 正常值
3~10岁:65~228μmol/L(0.6~2.1mg/dl);
>11岁: 33~185μmol/L(0.3~1.7mg/dl)。
3.7 临床意义
升高:甲状腺功能亢进、慢性肾功能衰竭、糖尿病、肝硬化、高血脂症、肥胖。
3.8 附注
若血清游离脂肪酸浓度大于2mmol/L可适当稀释后再测。