3 概述
乳酸脱氢酶（LDH或LD）是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中，以心、肾、骨骼肌含量最高，肝、脾、胰和肺组织次之，各组织的细胞浆内该酶活力为血清的500～1000倍，红细胞内酶活性为血清的100倍。LDH测定方法主要有比色法和连续监测法。
4 血清乳酸脱氢酶医学检查
4.1 分类
4.2 取材
4.3 原理
（1）比色法：LDH以NAD＋作氢的受体，催化乳酸脱氢，生成丙酮酸，后者与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液呈红色，根据颜色深浅求出酶活性。
（2）连续监测法：LDH可催化L-乳酸生成丙酮酸，同时NAD＋还原成NADH，在340nm处吸光度的增高速率与酶活力成正比。
4.4 试剂
（1）比色法：
①底物缓冲液（含0.3mol/L乳酸锂，pH8.8）：取乳酸锂2.88g，二乙醇胺2.1g，加蒸馏水约80ml溶解，以1mol/L HCl调pH8.8，加水至100ml。
②11.3mmol/L辅酶Ⅰ（NAD）溶液：称氧化型辅酶Ⅰ 15mg，溶于20ml蒸馏水中，冰箱保存可用2周。
③1mmol/L 2，4-二硝基苯肼（DNPH）溶液：称取DNPH 200mg，加10mol/L HCl 100ml，溶后加水至1000ml，置棕色瓶内室温保存。
④0.4mol/L NaOH溶液。
⑤1mmol/L丙酮酸标准液：称取丙酮酸钠（AR级）11.0mg，以底物缓冲液溶解并稀释至100ml，临用前配制。
（2）连续监测法：
①55mmol/L乳酸锂Tris缓冲液：称取乳酸锂5.28g，Tris 6.68g，溶于800ml蒸馏水中，在37℃水浴箱中用1mol/L HCl调pH至8.9（约需46ml），加水至1000ml，冰箱保存。
②12mmol/L NAD溶液：称取NAD 79.6mg，溶于10ml蒸馏水中，冰箱保存可用2周。
③基质应用液（含NAD 6mmol/L）：根据当天用量将上述NAD溶液和乳酸钾Tris缓冲液等量混合即可。商品试剂盒按其说明溶解，恢复至室温25℃使用。
4.5 操作方法
（1）比色法：按表1操作。
混匀，室温放置5min后，在440nm波长，比色杯光径1.0cm，蒸馏水调零点，读取各管吸光度，以AU-AC之差值查标准曲线，求出LDH活力单位。
附注：
①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物，但因其为水溶液，含量不够准确，且保存不当易产生酮酸类物质，抑制酶促反应。而乳酸锂为固体，稳定，易于称量。
②除二乙醇胺缓冲液外，也可用Tris或焦磷酸缓冲液，避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用，提高了阳性检出率。
③比色应在5～15min内完成，否则吸光度降低。
④结果＞2500U时，可用生理盐水稀释标本后再测，其结果乘以稀释倍数。
（2）连续监测法：各实验室可根据本室生化自动仪型号及介绍操作。主要参数为340nm波长，37℃，吸样量500μl，连续监测时间60s，标本与试剂体积之比为1∶50。
附注：
①标本勿溶血，当溶血达Hb 0.8g/L时，LDH活性可升高58%。
②标本于室温（25℃）保存，2天内酶活性稳定，冰箱保存酶活性降低，－20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。
③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意，草酸盐可抑制LDH活性。
④复溶后溶液变浊或初始吸光度＞0.5应弃去。
⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性，但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同，其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物，在340nm监测吸光度增高速率为正向反应，以LD-L表示；以丙酮酸和NADH为底物，监测340nm吸光度下降速率为逆向反应，以LD-P表示。正逆反应两法相比，LD-L法的主要优点是：A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大，前者冰箱可保存6个月以上，而后者仅几天；B.速率反应的线性范围（吸光度对监测时间t作图）较宽；C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快，其参考值约为LD-L的2倍。
4.6 正常值
（1）比色法：150～450U/L。
（2）连续监测法：男80～280U/L
女100～230U/L
4.7 临床意义
（1）心肌梗死：发病10～12h升高，24～48h达高峰，8～9天后恢复正常。与CK相比，虽然酶活性出现较迟，阳性率较低，但持续时间长，且活性增高的程度与心肌梗死的病情密切相关，梗死范围越大，其酶活性越高。若LDH增高后恢复迟缓，或在病程中再次增高，提示梗死范围扩大，预后不良。
（2）肝脏疾病：急性肝炎或慢性活动性肝炎LDH常显著或中度升高。其敏感度略低于ALT。肝癌时LDH活性明显升高，尤其是转移性肝癌增高更显著。可达1000U/L。
（3）血液病：白血病、巨幼红细胞贫血、恶性淋巴瘤等LDH活性升高。
（4）其他：营养不良、横纹肌损伤、胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升高。