4 phi(φ)小体染色的医学检查
phi(φ)小体染色4.1 检查名称
phi(φ)小体染色
4.2 分类
血细胞化学染色
4.3 phi(φ)小体染色的测定原理
由于白血性原、幼粒(单)细胞内某种特异性生物化学的紊乱,致使细胞器内具有氢过氧化物酶(HPO)活性的轴类晶体所排出的球状颗粒发生畸变而分离,或是由于嗜天青颗粒的畸变与肿胀,进而形成φ小体。当采用3,3′-二氨基联苯胺(DAB)/H2O2基质液孵育,及铜盐处理的HPO染色技术,这种HPO阳性的小体即能催化DAB起过氧化反应而被染色。
4.4 试剂
1.25%戊二醛
1% 甲醛
(2)0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.3~7.6)。
(3)9.0g/L NaCl液。
(4)基质液(须于临用前现配)。
(5)5.0g/L硝酸铜液(用0.05mol/L Tris-HCl pH 7.3~7.6缓冲液配制)。
(6)Wright-Giemsa(复染)液。
(7)改良Papanicolaou(复染)液。
先将苏木精溶于热蒸馏水中,加硫酸钾铝、碘酸钠,搅至全溶,再加水合氯醛和柠檬酸,加热至沸5min,冷却后过滤备用。
②稀盐酸乙醇液:取浓盐酸0.5ml,加70%乙醇至100ml。
③稀碳酸锂溶液:在100ml蒸馏水中,加饱和碳酸锂1至数滴。
④橘黄G6液:以橘黄G60.5g溶于5ml蒸馏水中,再加无水乙醇至100ml。
⑤EA50:可由下列染料配制而成。
A.亮绿液:亮绿(1ight green)0.5g溶于5ml蒸馏水中,再加无水乙醇至100ml。
B.俾斯麦棕液:俾斯麦棕0.5g溶于5ml蒸馏水中,再加无水乙醇至100ml。
C.黄色伊红液:黄色伊红(eosin Y)0.5g溶于5ml蒸馏水中,再加无水乙醇至100ml。
将上述亮绿液27ml、俾斯麦棕液10ml、黄色伊红液45ml混合后加95%乙醇至100ml,再加磷钨酸0.2g和饱和碳酸锂液1滴,混匀。
(注:国外有成品EA50出售)
⑥各种不同浓度乙醇。
4.5 操作方法
(1)DAB染色步骤:干燥骨髓(血)片用戊二醛-甲醛固定液固定2min,生理盐水漂洗后保存于盐水内直至下一步染色止。置基质液中孵育3min,0.05mol/L Tris-HCl(pH7.3~7.6)快速漂洗3次,置5.0g/L,硝酸铜液内2min,生理盐水漂洗,干后直接镜检或经复染后镜检。
(2)改良巴氏复染步骤:
①DAB染色完毕后标本仍保存于生理盐水中,直至下步染色开始。
②在苏木精染液内染1min,取出后水洗。
④稀碳酸锂内1min,水洗2min。
⑤依次在50%、70%、80%、95%乙醇内脱水各0.5min。
⑥在橘黄G6中染1min。
⑦95%乙醇内浸洗2次,每次10s。
⑧在EA50液内染10min。
⑨95%乙醇内浸洗2次,每次3min。
⑩无水乙醇内浸洗2次,每次1min。
4.6 正常值
光镜下φ小体呈棕色细棒状或纺锤形、大圆颗粒形,1条或多条。
4.7 化验结果临床意义
主要见于急性髓性白血病(急粒、急性早幼粒、急性单核细胞白血病)患者的原、幼细胞,以及一些慢粒的“髓性”急变者的原、幼细胞中。
4.8 附注
因此,Φ小体染色具有很强的病理意义,有助于白血病类型的鉴别。